| 高速逆流色谱技术在分离制备天然产物及其活性部位中的应用研究 | |
| 段文达 | |
| Thesis Advisor | 邸多隆 |
| 2020-08-26 | |
| Degree Grantor | 中国科学院大学 |
| Place of Conferral | 北京 |
| Degree Name | 理学博士 |
| Degree Discipline | 分析化学 |
| Keyword | 高速逆流色谱,枸杞,楤木,油橄榄叶提取物 |
| Abstract | 高速逆流色谱（High-speed counter-current chromatography, HSCCC）作为一种液液分配色谱，因其无需固相支持、无不可逆吸附、样品回收率高、载样量大、溶剂体系和分离模式组合多样等优点，已广泛用于分离领域。但是高速逆流色谱同样也有缺陷，其分离效能低于高效液相色谱（High performance liquid chromatography，HPLC）和气相色谱（Gas chromatography，GC），而且长时间分离也会消耗大量的溶剂。因此，本文以天然产物为研究对象，围绕HSCCC色谱在天然产物分离应用中的优势以及其在大规模制备时溶剂消耗大不利于工业化的不足开展了研究工作，具体研究内容如下： 1. 针对高速逆流色谱因在大规模制备时溶剂使用量大、分离成本高而阻碍其工业应用这一不利因素，使用活性炭作为吸附剂对高速逆流色谱的柱后溶剂经过再生处理后再将其循环使用，并将此技术用于分离枸杞中的玉米黄质。结果表明：在经过5次进样分离后，与常规的高速逆流色谱相比，获得同样多的产品，高速逆流色谱溶剂再生循环系统能够节约溶剂50%以上，其流动相的单位产率（玉米黄质/所需流动相，mg/mL）为0.026 mg·mL-1，而常规高速逆流色谱流动相的单位产率为0.0113 mg·mL-1，在不影响玉米黄质纯度（80.5%）的前提下，明显提高了单位溶剂的分离效率，显著节约了分离溶剂。 2. 用HSCCC两相溶剂系统乙酸乙酯-正丁醇-水（4:1:5，v/v/v）和三相溶剂系统正己烷-乙酸乙脂-乙腈-水（4:3:4:3.5，v/v/v/v）分别对枸杞提取物的成分进行研究，经两种溶剂系统分离后均得到槲皮素- 3- O-β-D-芸香糖苷，纯度分别为90.6%和92.0%，三相溶剂系统所得样品含量稍高，可能与其经过三相洗脱，杂质影响更少有关。 3. 应用HSCCC结合α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性抑制对楤木中降血糖活性成分进行分离，将HSCCC分离得到的活性部位采用HPLC-MS检测出活性成分为咖啡酸（Caffeic acid）、阿魏酸（Ferulic acid）、异贝壳杉烯酸（Kaurenoic acid）和齐墩果酸（Oleanolic acid）。其中异贝壳杉烯酸对α-淀粉酶的IC50 = 28.26 ± 1.52 μg·mL-1，对α-葡萄糖苷酶的IC50 = 0.386 ± 0.011 μg·mL-1，均高于阳性药物阿卡波糖。推测楤木的降血糖机制可能与其抑制消化酶有关。并对HSCCC分离后的活性部位和药材中的4种活性成分用HPLC测定了其含量，发现HSCCC分段后提取物中异贝壳杉烯酸的含量高于药材中的含量，而咖啡酸和齐墩果酸在药材中的含量高于提取物的含量，阿魏酸几乎没有变化，该结果表明采用HSCCC进行样品处理的整个过程成功富集了异贝壳杉烯酸。 4. 采用db/db自发性糖尿病小鼠作为研究对象，通过检测给药后空腹血糖（FBG）、葡萄糖耐量（OGTT）、胰岛素耐量（ITT）、胰岛素水平（INS）、胰岛素敏感指数（ISI）、糖化血清蛋白（GSP）及游离脂肪酸（NEFA），考察了不同剂量的油橄榄叶提取物（125，250，500，1000 mg·kg-1）对2型糖尿病db/db模型小鼠的降血糖作用。同时还考察了油橄榄叶提取物（62.5、125、250及500 mg·kg-1）对肾上腺素诱导高血糖大鼠模型糖原动员的作用以及调节ApoE基因敲除小鼠脂质代谢的作用。结果显示油橄榄叶提取物对自发性2型糖尿病模型动物具有降血糖作用，其作用机制可能与调节脂质代谢、改善胰岛素抵抗有关，也可能与其能够抑制糖原动员、糖异生有关，其作用机制有待进一步深入研究。 |
| MOST Discipline Catalogue | 分析化学 |
| Pages | 140 |
| Language | 中文 |
| Document Type | 学位论文 |
| Identifier | http://ir.licp.cn/handle/362003/27378 |
| Collection | 中科院西北特色植物资源化学重点实验室/甘肃省天然药物重点实验室 |
| Affiliation | 1.中国科学院兰州化学物理研究所; 2.中国科学院大学 |
| Recommended Citation GB/T 7714 | 段文达. 高速逆流色谱技术在分离制备天然产物及其活性部位中的应用研究[D]. 北京. 中国科学院大学,2020. |
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